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產品名稱:

J.gammal(MEC-2原管)人急性T細胞白血病細胞

產品型號: 產品時間: 2018-12-28
J.gammal(MEC-2原管)人急性T細胞白血病細胞
細胞培養的基本原理與技術 現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術,而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系,特別是在醫藥領域的發展,細胞培養更具有特殊的作用和價值。

產品概述

J.gammal(MEC-2原管)人急性T細胞白血病細胞

規格:25cm2培養瓶一瓶
特點:細胞代數為2-3代 
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書 
細胞來源:ATCC、DSMZ、ECACC以及少數國內外大學建系。 
貨期:1-2周 
運輸方式:快遞運輸 

售后:收到人結腸腺癌細胞系;LS123后7天,如發現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時傳真或E-mail致銷售人員,我們將盡快為您解決。 

 

二、無菌操作基本技術 
1. 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10 分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。
2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域,勿在邊緣之非無菌區域操作。
3. 小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol 之產生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭之傷害等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力 
5.2. CO2 培養箱之CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。
5.3. 無菌操作臺內之airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000 小時/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水

1、請問工作濃度的胰酶是不是應保存在-20度?如果放在4度冰箱可以保存多久呢?是不是幾個小時就會失去活性?
平時放在-20度,分裝在50毫升螺口管,用時拿一管放4度用。

2. 粉末培養基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個月,如在-20度存放時間可長一些,但*好也不要超過3-4個月,可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,但我在過去的4年里一直是做原代細胞培養的,細胞嬌弱,經驗表明放置時間不宜過長。
認真按照操作規程進行實驗,一般不大會導致污染,很多情況下是由于所用的試劑或培養基有污染而使實驗失敗,
 
3. 關于實驗用品的清洗與消毒,我的經驗是:用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,然后加少許清洗劑,以超聲波洗滌30min左右,(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),撈出晾干,再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后,自來水清洗10-15遍,雙蒸水清洗3-4遍,晾干,高壓消毒后即可使用。
許多塑料制品也可以高壓消毒,例如培養瓶蓋,膠塞,吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,當然如果money有限,如進口的培養板、皿等,也可以重復使用1-2次,我當時使用方法是將其完全清潔后,使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,我做過多次,沒有出現問題。塑料培養瓶由于清洗消毒不便,*好不要重復使用,如一定要重復用,可用環氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)

在光鏡下,上皮細胞通常呈“鋪路石”樣排布,細胞之間有拉絲現象(即距離較遠的細胞可以通過細長的觸手相連),細胞有成片生長的特性。而間質細胞通常呈梭形,沒有有成片生長的特性,細胞之間的聯系不緊密。但是細胞的形態特征會因為生長條件的改變而改變,如HeLa細胞是上皮細胞,但是在酸性培養條件下會變為梭形。上皮細胞之間都有特征性的緊密連接(橋粒)結構,因此可以通過觀察培養細胞的超微結構來判斷細胞的類型,如果有緊密連接,就必然是上皮細胞。這是一錘定音的證據。注意不要把細胞消化下來做電鏡,要用細胞刮刮下來后做電鏡。此外每一種上皮細胞都有其特征的細胞角蛋白的表達(cytokertin, CK),可以查一下子宮內膜腺上皮細胞表達的CK分子,然后進行免疫細胞化學的鑒定。
在偏堿的情況下培養,耐受能力會逐漸下降,可能是產生脫壁現象的原因,后來我重新測了一下培養基,為7.5左右,我用滅菌的HCL調了一下,培養基顏色變成淡紅透亮,再次培養,發現細胞貼壁比較好了,搏動效果也不錯,因此,我以后每次培養前都要重新調好PH值,我覺得很多因素是能影響PH值的
血清質量不好,影響了細胞生長。所以,我認為以后養細胞,用的血清濃度*好是每批次血清都摸一下,不一定要以參考文獻為準,畢竟國產的血清質量差異比較大啊。
人結腸腺癌細胞系;LS123細胞無菌操作是關鍵,對于配制培養液時,有些人為了讓培養粉充分溶解,攪拌4小時或更長時間。其實這完全沒有必要,一般培養基的固體組分還是易溶于水的,攪拌的時間長了會增加污染機會,雖然后來濾過除菌了,但細菌的代謝產物比如脂多糖誰能夠把它濾掉?細菌的代謝是很快的,甚至在常溫下20min就可以繁殖一代,太可怕了。我的經驗就是攪拌30min-60min就把它過濾。
另外關于培養基的pH問題,一般按照說明書操作,加入所說的NaHCO3量,與預計的pH不會有什么距離,也就是說基本上不用調pH,如果相差大,要考慮三蒸水的質量是否有所下降,當然這時調pH也是不得已而為之。我配培養基時基本上不調pH,只是用試紙檢測一下pH,觀察一下培養基的顏色。

(1)東西一定要用自己的。既不要借別人的,也不要借給別人??赡艽蠹矣X得比較自私。實際上還是很有好處的。并不是每個人的操作都規范,因此相互之間串著用,很容易造成交叉污染。
(2)我習慣口對口倒液體,在倒前倒后都要在酒精燈上過一下。自己認為比起用吸管吸更能很好的防止污染。步驟越簡單,越能防止污染。而且還能節省很多吸管。
(3)一次將所有的所需要試劑、工具放入工作臺。不要做到半路,又出工作間拿東西,這樣增加了污染的機會。
(4)整個操作要快、動作要輕、而且不要干其他的事情。比如手機響了,*好不要接。我一般操作的時候將手機關了,手機聲音響起,好煩躁。
(5)我一般開紫外線照射臺的時候,就將培養基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細菌。因此用它的也一定要勤換水。從水域鍋那出后,*好找個毛巾插干上面的水。
(6)操作前要洗手,用75%酒精搽手。用完操作臺,要打掃衛生。
人結腸腺癌細胞系;LS123細胞要經常凍存,我一般只要細胞狀態好就將細胞凍存起來。細胞狀態差了,扔掉,重新復蘇。這是一個必須養成的習慣。畢竟很多情況下,細胞并不是因為污染了,才讓你感到頭痛。這樣你不會擔心沒有種子了。我一般是不加雙抗的,只要注意,不會污染。

J.gammal(MEC-2原管)人急性T細胞白血病細胞

過濾時不要用槍吹細胞!! 如果用力吹,篩網就像刀片一樣,把你的細胞全部切碎!!

刷玻璃器皿的過程:初洗、泡酸(一天)、自來水沖洗(10遍)、純化水沖洗(3遍)、注射用水沖洗(3遍)。感覺過于苛刻,自來水只沖洗3遍。被老師發現后,一陣痛批,才知道這是極其關鍵的一步,殘留的酸可能會抑制細胞生長,甚至導致細胞死亡,痛失辛苦得來的細胞,心血付之東流。無知不能無畏,一定不能大意。

做好準備工作。不要急于投身到人結腸腺癌細胞系;LS123細胞細胞培養中去,要先設定計劃:步驟,工具,試劑。特別是將細胞用于大規模生產時,尤其如此。eg.經過干熱滅菌的容器一般認為可以在一周內保持無菌狀態,如果準備多了,用不完的就得重新滅菌,耗費能源、占用滅菌空間,不值得;干熱滅菌需要一天的時間,當器皿準備不足時,只能干著急,錯過了*佳操作時間,也許得很久才能將細胞狀態再調整好。

對于驕氣的細胞,我一般都是*天處理完后,加少量培基(夠蓋住瓶底部),第二天換液,以免死細胞和碎片對活的產生不良影響。

新配的培養基直接用很清亮,但是在-20度保存一段時間后再溶解就要出現很多雜質,用37度水孵育沒有效果,握在手里不停搖動非常有效。其實對于操作熟練的人來說,污染并不是我們想像那樣容易出現,園子里很多人都問否污問題,而培養基的PH值往往被忽略,而且大多數人都習慣于一次配制1升培養基,分裝成10X100ml,用1瓶,另外9瓶放在-20度保存,很容易出現結晶,鏡下看就是一些桿狀的物資,有時候晃動培養基,肉眼就可以看到很多沉淀,這就需要我們在用之前好好搖勻了。
凍存: 當人結腸腺癌細胞系;LS123細胞細胞狀態好,或者代數比較早,一定要大量凍存,不要吝惜暫時的大批使用血清,當細胞狀態不好,長不起來的時候,馬上取出來復蘇,省時省力,不要去嘗試努力恢復狀態不好的細胞,費時間也費血清,會令你痛苦不堪。另外凍存的細胞不要放到一個地方,-80度,液氮(甚至不同的液氮罐)都放一點,誰也不敢保證不出意外,冰箱也可能有化的時候(我們-20度冰箱就化過),都放在一塊容易全軍覆沒。 

按照試劑的保存標準保存,象血清、胰酶等沒開封的-20℃,開封后-4℃保存一般不超過7天(用完它吧,不然浪費了)
5、一定要弄清楚每個組分的作用,特點,比如NaHCO3容易分解,因此培養基在過濾除菌時pH會上升,一般是0.1-0.3,所以在過濾之前,要把培養基的pH調低0.1-0.3。如果你不了解NaHCO3容易分解的特點,就不會做相應的處理,那么培養基不符和要求,細胞就長不好
臺盼藍主要用來鑒定原代培養細胞時,細胞分離后的存活情況,用0.4%臺盼藍直接染色5-10分鐘,在顯微鏡下觀察即可,活細胞不被染色。方便易用,因此在實驗室中比較常用,尤其在心肌細胞原代培養中。

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